琼脂糖核酸电泳

1.用蒸馏水将制胶模具和梳子冲洗干净,放在制胶平板上,封闭模具边缘,架好梳子;

2.根据欲分离DNA片段大小用凝胶缓冲液配制适宜浓度的琼脂糖凝胶:准确称量琼脂糖干粉,加入到配胶用的三角烧瓶内,定量加入电泳缓冲液(一般20~30 ml);

3.放入到微波炉内加热熔化。冷却片刻,加入一滴荧光染料,轻轻旋转以充分混匀凝胶溶液,倒入电泳槽中,待其凝固;

4.室温下30~45分钟后凝胶完全凝结,小心拔出梳子,将凝胶安放在电泳槽内;

5.向电泳槽中倒入电泳缓冲液,其量以没过胶面1mm为宜,如样品孔内有气泡,应设法除去;

6.在DNA样品中加入10×体积的载样缓冲液(loading buffer),混匀后,用枪将样品混合液缓慢加入被浸没的凝胶加样孔内;

7.接通电源,红色为正极,黑色为负极,切记DNA样品由负极往正极泳动 (靠近加样孔的一端为负)。一般60~100V电压,电泳20~40min即可;

8.根据指示剂泳动的位置,判断是否终止电泳;

9.电泳完毕,关上电源,在凝胶成像仪上观察电泳带及其位置,并与核酸分子量标准Marker比较被扩增产物的大小。

琼脂糖凝胶浓度与线形DNA的最佳分辨范围

琼脂糖凝胶浓度

线形DNA的最佳分辨范围(bp)

0.5%

1,000~30,000

0.7%

800~12,000

1.0%

500~10,000

1.2%

400~7,000

1.5%

200~3,000

2.0%

50~2,000